L'insegnamento è organizzato come segue:

Obiettivi formativi

Modulo: Teoria
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Il corso si propone di fornire una conoscenza approfondita sulla biologia delle cellule eucariotiche, con particolare attenzione alle cellule vegetali, e soprattutto relativamente alle tematiche della compartimentazione e del traffico intracellulare delle macromolecole nonché dei meccanismi di targeting delle proteine, e del controllo della proliferazione cellulare.
Tali conoscenze sono sono necessarie al biotecnologo nella fase di progettazione di sistemi vegetali biotech.
Verrà inoltre approfondito un aspetto di impatto più immediatamente applicativo delle biotecnologie cellulari, ovvero l’utilizzo di cellule vegetali in bioreattore per la produzione di metaboliti secondari di interesse industriale.


Modulo: Laboratorio
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Corso pratico di analisi dell'espressione genica in cellule e tessuti attraverso la tecnica di IBRIDAZIONE IN SITU.

Programma

Modulo: Teoria
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1) Biologia cellulare:
-trasporto ed integrazione delle proteine attraverso le membrane (RE, targeting co-trasduzionale e post-trasduzionale, struttura e funzione del traslocone sec61);
-il GA e la -N glicosilazione delle proteine nel RE e post-RE; ruolo e aspetti applicativi;
-il controllo di qualità nella via di secrezione
-meccanismi di formazione e fusione di vescicole lungo la via di secrezione
-targeting delle proteine ai corpi lipidici
-targeting delle proteine ai corpi proteici
-targeting delle proteine ai lisosomi e ai vacuoli
-targeting delle proteine a plastidi e mitocondri
- il controllo del ciclo cellulare e della divisione cellulare
2) utilizzazione delle cellule vegetali in bioreattore per la produzione di molecole di interesse industriale:
-le colture di cellule vegetali come bioreattori: introduzione
-produzione di metaboliti secondari: strategie per l’aumento della produttività (selezione, ottimizzazione delle condizioni di coltura, elicitazione)
-produzione di metaboliti secondari attraverso metodiche di ingegnerizzazione metabolica


Modulo: Laboratorio
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Durante il laboratorio verranno condotte le seguenti esperienze:

-fissazione ed inclusione in paraffina di materiale biologico;
-preparazione di sezioni su vetrino mediante utilizzo di microtomo;
-rimozione della paraffina e idratazione dei campioni;
-preparazione di sonde di RNA marcato con digossigenina, mediante trascrizione in vitro partendo dal costrutto di interesse clonato in apposito vettore in E.coli;
-tecniche di controllo della bontà della sonda;
-ibridazione in situ con la sonnda e i campioni prepapati precedentemente;
-rivelazione degli ibridi RNA-RNA su vetrino mediante utilizzo di anticorpo anti digossigenina coniugato con fosfatasi alcalina, e opportuna reazione con i substrati delle'enzima stesso (NBT/BCIP);
-osservazione dei preparati al microscopio ottico e studio dell'espressione del gene scelto.

Modalità d'esame

Modulo: Teoria
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esame orale.


Modulo: Laboratorio
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Domanda attinente alle esepreinze svolte durante l'esame del corso teorico di Biotecnologie Cellulari